今天来聊聊关于pod酶活性计算公式,pod酶的文章,现在就为大家来简单介绍下pod酶活性计算公式,pod酶,希望对各位小伙伴们有所帮助。
1、求教植物叶片POD酶活性的大致范围酶活性测定的原理:超氧物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性的测定 SOD采用氮蓝四唑(nitro-blue tetrazolium,NBT)法(Beauchamp和Fridovich,1971)。
2、反应步骤为:取200μl粗提液,加入3.7 ml NBT反应液50mmol/LpH7.8的磷酸缓冲液(PBS)配制的含77.12μmol/L氮蓝四唑, 100μmol/LEDTA-Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕,在30℃下保温2分钟后加入100μl核黄素溶液(pH7.8的50mmol/L磷酸缓冲液中含80.2μmol/L 核黄素和100μmol/LEDTA-Na2),在4000Lx日光下反应20min。
3、然后迅速测定A560。
4、以不照光的管做空白。
5、用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。
6、酶活性按以下公式计算:以抑制NBT光化还原的50%为一个SOD活性单位,结果以U/mg蛋白表示。
7、以加缓冲液代替酶液的作为对照。
8、SOD总活性=(Ack-AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中, Ack为照光对照管的吸光度;AE为样品管的吸光度;V为样品液总体积(ml);Vt为测定时样品用量(ml);W为样品鲜重(g)或蛋白质含量(mg)。
9、过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性测定 CAT 活性参照Aebi (1984)[7]的方法进行测定。
10、用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL 。
11、400 μL反应液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0),30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。
12、反应从加入过氧化氢开始计时,连续测定在240 nm吸光度的降低值。
13、酶活性定义为:一个过氧化氢酶单位相当于在规定条件下于温度25℃,pH7.0条件下1分钟分解1μmol过氧化氢所需酶量,结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。
14、多酚氧化酶(Polyphenoloxidase,PPO)活性的测定 PPO活性测定采用邻苯二酚法(Aquino-Bolaños和Mercado-Silva,2004)。
15、用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。
16、350µL反应液(用50mmol/L,pH6.4的PBS配制,内含100µmol/L邻苯二酚)中加入50 µL的粗酶液,平衡1分钟后连续测定398nm吸光度的变化。
17、以1分钟内398nm吸光度上升0.01为一个酶活性单位,结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。
18、过氧化物酶(Peroxidase,POD)活性测定POD活性测定采用愈创木酚法(Lurie等,1997)。
19、用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。
20、反应体系为30μL粗酶液,290 µL 0.3%愈创木酚(用50 mmol/L的PBS配制,pH 6.4)和 80µL0.3%H2O2(用50 mmol/L的PBS配制,pH 6.4)。
21、反应在加入H2O2 后开始准确记时。
22、连续吸光度在470 nm的上升值。
23、酶活性以每分钟上升0.01为一个单位,结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。
相信通过pod酶这篇文章能帮到你,在和好朋友分享的时候,也欢迎感兴趣小伙伴们一起来探讨。
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